후아유 7회 다운로드

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전자 포뮬러는 15 일 동안 펀치 후에 국 소 적으로 적용 하였으며, 당뇨 성 비 히 클 및 당뇨 식 마우스는 8 mm 직경의 금속 펀치와 함께 촬영 된 피부 상처의 조직 및 CO2에 의해 안락사 시켰다. 조직은 즉시 액체 질소에 넣고-80 ° c에 보관 하였다. 각각의 샘플에 대해, 0.1 g을 상기 조직 으로부터 취한 후 얼음 (50 μ l에 1 × PBS 씩 첨가 하 여 각 시료에 분쇄 하 여 조직 균질 화 하였다). 이어서 50 μ l를 2 × 세포 용 해 완충 액과 혼합 하 고 얼음에 30 분 동안 인큐베이션 하였다. 혼합물을 40 ° c에서 15 분, 12000 rpm/min으로 원심 분리 하 고 상 등 액을 유지 하였다. 다음으로, 각 시료에 대해 50 μ l을 상기 상층 액 으로부터 취한 후, 50 μ l의 2 × SDS 로딩 완충 액과 혼합 하 고, 100 ° c의 수 욕에서 5 분간가 열 하였다. 냉각 한 후, 혼합물을 1 분 3000 rpm/min으로 원심 분리 하 여 바이오-Rad EP 시스템을 이용 하 여 각 시료의 20 μ g을 수행 하였다. 조건은 제 2 시간 동안 100 min에 대해 처음으로 30 분 동안 70 및 90 V 였다. 상기 단백질은 아이스 배스 100의 2 h에 대 한 바이오-Rad 전달 시스템으로 폴 리 아크릴 아 미드 겔에서 니트로 여과 막으로 이송 되었다. 상기 단백질은 물로 세척 한 후 5 ~ 10 분간 염색 액에 포 소 스 얼룩 처리 하였다. 표적 단백질을 가진 니트로 막은 분자 질량에 따라 조정 되었다.

멤브레인을 30 ml 블록 완충 액에 넣고 1 시간 동안 실 온에서 동요 테이블에 흔들어 주었다. 일차 항 체 (Ab) 반응: 관련 표적 단백질 (1:1000)의 특이 적 항 체를 용액에 첨가 하 고, 2 시간 동안 실 온에서 진 탕 테이블에 인큐베이션 하였다. 상기 멤브레인을 5 분간 1 회 2 시간 동안 TBST로 세척 하 고, 1 일 2 차 반응 시켰다. 보조 Ab 반응은 과산화 효소 (잭슨 1:2000)의 비율에 따라 상응 하는 이차 Ab의 결합을 첨가 하 고, 멤브레인이 흔들리기에 해치 되었다 실 온에서 테이블. 멤브레인을 1 회 15 분간 TBST에 의해 5 번 세척 하였고, ECL 발광 반응: 멤브레인은 개발 되 고 노출 된 향상 된 화학 발광 (ECL) 발광 시 약으로 처리 하였다. 오 딧 세이를 개발 하기 위해 사용 하였으며, 정량 분석을 위해 700 (적색) 또는 800 (녹색)을 선택 하였다. ImageJ 1.42 q는 검사 결과 얻기 위해 정량 분석에 사용 되었다. 한편, 목표 스트립의 상대적인 흡 광도는 확보 되었다 (각 웨스턴 블 럿의 제어 스트립의 흡 광도는 상대 값 1로 설정 하였다). 갭은 웨스턴 블랏 로딩 제어 항 체로 서 사용 되어 왔다.

2005 및 2006에서 두 개의 볼륨으로 출판 된이 소설, 거의 100만 사본을 여기에 판매 했으며, 책 불법 복제가 널리 퍼져 있고 소설이 인터넷에서 무료로 다운로드 되는 국가에서 놀라운 업적을 달성 했습니다. 크로마 토 그래프는 6130 시리즈 ESI 질량 분석기와 결합 된 광다이오드 어레이 (PDA) 검출기가 장착 된 애질런트 1200 시리즈 분석 시스템을 사용 하 여 액체 형 질량 분석기 (LC-MS)에 의해 분석 되었습니다. 간략하게는, 일정 한 중량 3.65 mg loureirin A 및 3.62 mg 루 레 인 B를 메탄올을 사용 하 여 10 ml 측정 실린더에 용 해 시킨 후, 스케일 마크에 희석 하 고, 필요한 기준 용액으로 잘 흔들어 주었다. 다음 단계는 1 g의 식 각을 메탄올-디 에틸 에테르 (595) 내지 20ml로 용 해 하 고, 수 욕 (60 ° c)에서 5 분간가 열 한 후, 냉각 하 여 상층 액만을 복용 하였다.